Kémia | Biokémia » Triglicerid és koleszterin meghatározása lipoproteinekben

BIOKÉMIA II – GYAKORLATOK Triglicerid és koleszterin meghatározása lipoproteinekben  Elméleti háttér    A lipidek a plazmában oldhatatlanok, ezért azok lipoproteinekben szállítódnak. A lipoproteinek keletkezése, felhasználása során fellépő zavarok különféle hipoilletve hiperlipoproteinaemiát okozhatnak. Ha lipidek plazma koncentrációja meghaladja a metabolizmushoz szükséges mennyiséget, az erekben atherosclerosisos plakk formájában rakódnak le. Az összkoleszterin 75%-a LDL (rossz), 25%-a HDL (jó).  Gyakorlat    Mintavétel Normál és beteg szérum összkoleszterin, HDL- és triglicerid tartalmát határozzuk meg. Polianionok és kétértékű kationok jelenlétében a VLDL és LDL frakciók csapadékot képeznek, a felülúszóban centrifugálás után maradó HDL-frakció meghatározható.    MgCl 2 -oldat, kicsapó

reagens és vizsgálandó plazma. Keverés, majd centrifugálás. Felülúszóból mikropipettával mintavétel.     Összkoleszterin meghatározás. Koleszterin-észterázzal hidrolizáljuk a koleszterin-észtereket. Bakteriális koleszterin oxidáz mellett ekvimoláris H 2 O 2 keletkezik. A H 2 O 2 peroxidáz hatására fenollal és amino-4-antipirinnel vörös komplexet képez, ami 500 nm-en fotometrálható.  Készítünk vakot, standard mintát, normál mintát (plazma), beteg mintát (plazma). A minták a reagenseket tartalmazzák 5 perc inkubálás 37 oC-on. 500 nm-en fotometrálás  n = 5,17, ha mmol/l   x E min ta E s tan dard  n    HDL-koleszterin meghatározás. Ugyanúgy minták, csak plazma helyett kicsapott felülúszó, illetve HDL-standard. Eljárás ugyanaz, a számított értéket 1,1-gyel szorozzuk a kicsapó reagens hígító hatása miatt.   Szérum trigliceridszint meghatározása. A TG-ból a lipáz

hatására glicerin és zsírsavak lesznek. BIOKÉMIA II – GYAKORLATOK    A glicerin+ATP (Mg2+ és glicerinkináz jelenlétében) glicerin-3-P + ADP lesz. Glicerin-3-P + O 2 (gli-3-P-oxidáz)  H 2 O 2 +dihidroxi-aceton-P H 2 O 2  színessé tehető, fotometrálható.  Készítünk vakot, standard mintát, normál mintát, beteg mintát. A minták a reagenseket tartalmazzák. A minta szérum  Eljárás az előbbiek szerint: 5 perc 37 oC-on.  Számítás az előzőek szerint, megadott n értékekkel.   LDL-koleszterin meghatározása. Az előző adatok felhasználásával: LDL  össz.  ( HDL  TG ) 5