Kémia | Biokémia » Fehérjék színreakciói, fehérjék mennyiségi meghatározása

BIOKÉMIA I. – GYAKORLAT Fehérjék színreakciói, fehérjék mennyiségi meghatározása  Elmann reakció      SH-csoportokra specifikus. Az Elmann-reagens DTNB-t tartalmaz, ami az SH-csoportokkal reagálva sárga színű tionitrobenzoesavat alkot. A fehérjét 7,5 pH-foszfátpufferben reagáltatjuk az Elmann-reagenssel. A mintát a vakmintával szemben 412 nm-en spektrofotometráljuk. Az E/c hányados ’c’ ismeretében az SH-csoport koncentrációjáról ad felvilágosítást.  Xantoprotein reakció   Aromás aminosavak (fenilalanin, tirozin, triptofán) adják a reakciót. A salétromsav nitrálja a benzolgyűrűt, a keletkezett nitrobenzol sárga színű.  Millon reakció    Fenolra (tirozin) specifikus. Millon-reagens hozzáadására melegítés közben piros színű nitromerkuribenzol keletkezik. A Millon-reagens Hg 2 (NO 3 ) 2 és Hg(NO 3

) 2 valamint HNO 3 elegye.  Adamkiewicz reakció   Triptofánra specifikus. Glioxilsavval tömény kénsav jelenlétében színes gyűrű (Schiff-bázis) keletkezik.  Biuret reakció      Peptidkötésre specifikus, legalább két peptidkötés (tripeptid) szükséges a pozitív reakcióhoz. A δ- O-ból kettő van a tripeptidben, ez így egy Cu2+-ionnal sókötést tud alkotni. Ezenkívül a N-ek koordinációs kötést alkotnak az ionnal. Lila kondenzációs termék keletkezik, aminek színintenzitása a peptidkötés mennyiségével arányos. Hígítási sor felhasználásával kalibrációs egyenest készítünk, majd vakkal szemben fotometrálva az ismeretlen oldatot leolvassuk a koncentrációt a kalibrációs egyenesről. A biuret hasonló reakciót ad, de ennél több köze nincs a dologhoz