Kémia | Biokémia » Kreatin-kináz aktivitás meghatározása szérumból

BIOKÉMIA II – GYAKORLAT Kreatin-kináz aktivitás meghatározása szérumból  Kreatin-kináz (CK)  A CK a következő reakciót katalizálja, a reakció reverzibilis!!!!: kreatin + ATP  kreatin-foszfát + ADP     Magas CK aktivitás zimban, szívizomban és agyban mérhető, ezeknek a szöveteknek ugyanis tartalék tápanyaga a kreatin-P. Az enzim két alegységből felépülő dimer (CK-M és CK-B) alegységek, melyek variációi eligazítanak a szöveti specificitásban. A vázizomszövetben a legnagyobb a CK-MM izoforma aktivitása, az agyban a CK-BB, a szívizomban pedig a CK-MB. A szérumban az össz-CK és a CK-MB aktivitás megemelkedik szívizombetegségek, AMI esetében, az emelkedés 10-12 óra után éri el a maximumát.  CK-MB aktivitás meghatározása    kreatin-P + ADP  kreatin + ATP (CK-MB) glukóz + ATP  glukóz-6-P + ADP

(hexokináz) glukóz-6-P + NADP  6-P-glukono-δ-lakton + NADPH (glukóz-6-P-DH)  a NADPH fotometrálható 340 nm-en, így annak koncentrációemelkedése (extinkcióemelkedés) CK-MB aktivitásra utal     „CK”-reagens  puffer, ADP, glukóz, NADP és kreatin-P hexokináz glukóz-6-P-DH serum (normál és AMI-s)   küvettában 5 percen át mérjük az ektinkcióváltozást a vakkal szemben (serum helyett deszt. víz) az értékeket grafikusan ábrázolva a normális serum linearis, az AMI-s emelkedő  az enzimaktivitást IU/l-ben adjuk meg