Kémia | Biokémia » Gélszűrés elvi alapja, felhasználása

BIOKÉMIA I. – GYAKORLAT Gélszűrés elvi alapja, felhasználása  Gélszűrés elvi alapja       Oszlopkromatográfiában elemi szemcséket tartalmazó, vízzel duzzadó gélt alkotó poliszacharid (16; Sephadex) vagy poliakrilamid gélt használunk. A gél pórusmérete beállítható, a keresztkötések számával. Megkülönböztetünk kizárt- és teljes térfogatot. A géloszlop az eluens oldattal van feltöltve. A felszínre rétegezve az elválasztandó keveréket, majd folyamatosan pótolva az eluenst, a keverék alkotórészei méret szerint szétválaszthatók. A nagyobb molekulaméretű anyagok csak a kizárt térfogatban mutathatók ki, ezért az oszlopon gyorsabban végig haladnak, korábbi frakciókban jelennek meg. A kisebbek a gélgyöngyökbe is bejutnak, lassabban érnek le, későbbi frakciókban jelennek meg.  Dextrán Blue 2000 és K 2 CrO 4

szétválasztása   Az oldatban a Dextran Blue molekulái kb. 2 kDa méretűek, hamarabb érnek az oszlop aljára, mint a kisebb CrO 4 ionok. Az oszlopon szétválnak, a Dextran Blue kék, a kromátion sárga. A frakciókban megjeleníthetők.  Szérumfehérje és KI elválasztása     Hasonló okokból most a fehérjék érnek le előbb, a korábbi frakciókba, majd a későbbiekbe a I- ionok. Mivel mindkettő színtelen, ezért láthatóvá kell tenni. Az összes frakcióba teszünk szulfoszalicilsavat, ami a fehérjéket kicsapja. Amelyik frakcióban már nincs csapadék, ott a jodid ionok valószínűsíthetők. Ezekbe Hipo oldatot csepegtetve a jóddal sárga, sárgásbarna elegyet ad. Bizonytalan esetben keményítővel a nyomokban jelen lévő jód is kimutatható