Datasheet
Year, pagecount:2013, 41 page(s)
Language:Hungarian
Downloads:7
Uploaded:May 29, 2021
Size:12 MB
Institution:
-
Comments:
Attachment:-
Download in PDF:Please log in!
No comments yet. You can be the first!
Content extract
Harcban állunk! Régóta Az immunrendszer működésének alapja: védelem a kórokozók ellen és tolerancia a saját szervezettel szemben Gazda immunitás sérülés Kórokozó Tolerancia A veleszületett és az adaptív immunválasz kórokozó Veleszületett immunitás hámsejtek Adaptív immunitás B limfociták Ellenanyagok T limfociták Effektor T sejtek fagociták komplement NK sejtek órák napok Fertőzéstől eltelt idő Az ellenanyagok szerepe a kórokozók semlegesítése Delves & Roitt 2000 NEJM Az aktív és a passzív immunitás Veleszületett immunitás Aktív (fertőzés) Immunitás Természetes Passzív (anyai) Adaptív immunitás Aktív (vakcináció) Mesterséges Passzív (ellenanyag terápia) A védőoltások kórokozót semlegesítő ellenanyag termelést serkentenek (mesterséges aktív immunitás) A vér ellenanyag koncentrációja az egyedfejlődés során változik Anyai immuntranszport (természetes passzív)
hónapok évek Immun hiányos beteg - intravénás immunglobulin kezelése (IVIG) (mesterséges passzív) Saját ellenanyag termelés (természetes aktív) Manz et al. 2005 Nature Rev Immunol Rh negatív vérsejt Anyai immuntranszport: természetes, passzív immunizálás Rh pozitív vérsejt életfontosságú, bár alkalmanként hátrányos Ellenanyag (IgG) Rh negatív vérsejt Ellenanyag (IgG) az Rh inkompatibilitás oka az anyai immuntranszport (hemolitikus anaemia) Rh pozitív vérsejt http://www.nlmnihgov/medlineplus/ency/presentations/100217 1htm Hemolitikus anémia állatokban x szamárkanca mén Kolosztrummal átadott anti-ló vörösvérsejt ellenanyagok Súlyos beteg öszvércsikó (ugyanannak a párnak a második csikaja) Lulut, a Budapesti Állatkertben született orrszarvút, mesterséges anyai immuntranszporttal (ló IgG) tettük védetté Születés utáni IgG szint idő (napok) Sós és mtsai. 2006 Az ellenanyagok
mesterséges alkalmazásai Terápia Mágikus lövedékek Diagnosztika Kígyóméreg elleni antitest terápia (mesterséges, passzív immunizálás) kígyóméreg Ellenanyag termelés birkában Állati eredetű fehérje emberben immunreakcióhoz vezet! Szervkilökődést megelőző antitest terápia (mesterséges, passzív immunizálás) egészséges vese Nyúlban termelt T-limfocita specifikus ellenanyagokkal ($ ~400 m/év) T-limfociták által elpusztított vese - szervkilökődés Állati eredetű fehérje emberben immunreakcióhoz vezet! Poliklonális ill. monoklonális ellenanyag tulajdonságai poliklonális ellenanyag monoklonális ellenanyag www.chemiconcom Monoklonális ellenanyagok előállítása Egér immunizálás a kérdéses molekulával Lépsejtek izolálása Mielóma sejtek Fúzió Hibridómák Szelekciós közegben tenyésztés Monoklonális ellenanyagok termelése Non-Hodgkin limfóma Tünet: A non-Hodgkin-limfóma legjellemzőbb
tünete a fájdalmatlan nyirokcsomó-megnagyobbodás, amely a nyakon, hónaljban vagy a lágyék területén jelentkezik, de más testtájékon is előfordulhat. Ha nagyobb csomót észlelünk, nem kell mindjárt limfómára gondolni, hiszen a különféle fertőzések okozta nyirokcsomóduzzanatok előfordulása gyakoribb, mint a rosszindulatú megbetegedés. Ha ez tartósan, két hét után is fennáll, vagy még a megfigyelési idő alatt tovább nő, és más okra nem derül fény, mindenképpen vizsgálódni kell tovább, részletes orvosi kivizsgálásra van szükség. Ok: a B-limfociták korlátlan osztódása csecsemőmirigy/tímusz csontvelő lép nyirokcsomók A nyaki nyirokcsomó megnagyobbodása utalhat rosszindulatú limfómára. A szervezet nyirok szervei Kezelés: kemoterápia, sugárkezelés, valamint immunterápia Non-Hodgkin limfóma – kezelési lehetőségek „Várj és figyelj” Besugárzás Kemoterápia Immunterápia Non-Hodgkin limfóma
kezelése - kemoterápia A mellkas felső régiójában egy nyirokcsomóból kialakult tumoros szövet. A tumoros szövet mérete jelentősen csökken a kemoterápia hatására. A daganatos nyiroksejtek gyorsan osztódnak ezért érzékenyek a megfelelő kemoterápiára, röntgenbesugárzásra. A betegek többsége jól reagál ezen kezelés valamelyikére, vagy a kettő kombinációjára. Bizonyos esetekben azonban agresszívabb kezelésre is szükség lehet. Hátránya, hogy nem specifikus, azaz a szervezet valamennyi gyorsan osztódó sejtjét elpusztítja – súlyos mellékhatásokkal, komplikációkkal jár. CD20 – ideális célpont An;géntől független érés Őssejt Pre-‐B-‐sejt CD20 Éretlen B-‐sejt An;géntől függő érés Ére8 B-‐sejt Ak;vált B-‐sejt Plazma sejt Rituximab - a CD20+ B sejteket célozza és pusztítja 1. Ellenanyagfüggő sejtfüggő sejtölés
(ADCC) Természetes ölő sejt Sejt lízis B-‐limfocita 2. Komplement-függő sejtölés (CDC) Komplement ak;válás Sejt lízis B-‐limfocita 3. Programozott sejthalál (apoptózis) kiváltása Sejt lízis B-‐limfocita Non-Hodgkin limfóma kezelése – monoklonális ellananyaggal (Rituximab) A hasüregben számos nyirokcsomó megnagyobbodása látható – tumoros nyirokcsomók Rituximab hatására a tumorok mérete jelentősen csökken, sőt eltűnik. A limfóma kezelésében mérföldkövet jelentett az immunterápiának az a formája, amely a daganatos nyiroksejtek ellen kifejlesztett ellenanyaggal, a gazdaszervezet jelentős károsítása nélkül csak a beteg sejteket pusztítja el. Ez az új, jól tolerálható immunterápia ma már a kezelés standard részévé vált. A célzott kezelés, egy a daganatsejtek felszínén nagy mennyiségben található fehérjéhez kötődik, és a szervezet
védekező rendszerének segítségével az így megjelölt beteg sejtek pusztulását eredményezi. Alkalmazásával a terápiás eredmények javulása észlelhető, a mellékhatások fokozódása nélkül. Tumorterápia ellenanyagokkal - anti-CD20 monoklonális ellenanyag (Rituximab) Forrás: Roche (Genentech) egér MAb-ok (Köhler és Milstein, 1975) A terápiás monoklonális ellenanyagok “evolúciója” 11 év muromonab-CD3 (Orthoclone OKT3), 1986 kiméra MAb-ok (Morrison és mtsai, 1984) 10 év abciximab (ReoPro), 1994 humanizált MAb-ok (Jones és mtsai, 1986) 11 év daclizumab (Zenapax), 1997 phage display segítségével nyert MAb-ok (McCafferty és mtsai, 1990) 12 év adalimumab (Humira), 2002 egér szekvenciák glikolizálódás helye humán szekvenciák CDR régiók humanizált egerek segítségével nyert humán MAb-ok (Lonberg és mtsai, Green és mtsai , 1994) 12 év panitumumab (Vectibix), 2006 | I I I I | I I I I | I I I I | I I I I | I I I I | I
I I I | I I I I | I I I 1980 1985 1990 1995 2000 2005 2010 1975 Lonberg, N. (2005) "Human an;bodies from transgenic animals." Nat Biotechnol 23 (9): 1117-‐1125 alapján módosítva – Nagy Antal Balázs MSc Humanizált transzgenikus egerek Jakobovits, A., R G Amado, et al (2007) "From XenoMouse technology to panitumumab, the first fully human an;body product from transgenic mice." Nat Biotechnol 25(10): 1134-‐1143 alapján módosítva – Nagy Antal Balázs Inak^v egér Ig! lánc gén keresztezés Inak^v egér IgH lánc gén dupla KO egér törzs (nem képes egér ellenanyagok előállítására) humán IgL gén
beültetése humán IgH gén beültetése keresztezés egér embrionális őssejtek csak humán ellenanyagok előállítására képes egér törzs humán és egér ellenanyagok előállítására is képes egér törzs egér IgH gén egér Ig! gén humán IgL gén humán IgH gén Dupla transzkromoszomális egér: a humán nehéz- és könnyű (k)–láncot hordozzák Tomizuka et al 2000 PNAS Humán poliklonális ellenanyagot termelő transzkromoszómális szarvasmarha - Hematech Kuroiwa et al. 2002 Nature Biotech Az FcRn szerepe az IgG homeosztázisban Roopenian and Akilesh 2007 -‐ alapján A szarvasmarha FcRn-t fokozott mértékben kifejező transzgénikus egerek előállítása bakteriális mesterséges kromoszómával (BAC) bFcRn mRNS (Northern
blot) vt bovin Tg#14 he ho Tg#19 he ho bFcRn kDa Fluorescence In Situ HybridizaJon bFcRn protein (Western blot) B4 vt Tg#14 Tg#19 63.8 -‐ 49.5 -‐ bFcRn 37.4 -‐ Bender és mtsai. 2007, Cervenak és mtsai 2011 bFcRn Tg egerekben fokozott mértékű antigén-specifikus ellenanyag termelődik Cervenak és mtsai. 2011 bFcRn Tg egerekben fokozott mértékű a humorális immunválasz: Nagyobb lép, több lépsejt, több antigén-specifikus B-sejt Cervenak és mtsai. 2011 A bFcRn Tg egerek hatékony immunválasza gyengén immunogén antigénekre az Ekiert et al. 2009 Science KLH-‐hoz konjugált HA2-‐pep;d (influenza
hemagglu;n konzervált, nem immundomináns epitópja) csak a Tg állatokban válto8 ki megfelelő immunválaszt Végh és mtsai. 2011 A bFcRn Tg egerek hatékony immunválasza az 1. típusú kannabisz receptorra (CB1) értékes monoklonális ellenanyag előállításához vezetett CB1-‐specifikus IgG Jter CB1-‐specifikus immunhisztokémiai jelölés agymetszeten Monoklonális ellenanyag előállítás Egér típus Hibridómák száma CB1 pozitív klónok (IgG) Balb/c 580 0 bFcRn Tg 1634 10 Nagy affinitású CB1-‐specifikus monoklonális ellenanyag 404 (3C2) Kd = 1.7 E-9M Együttműködés Dr. Katona Istvánnal (MTA, KOKI) Nyúl FcRn Tg nyúl fokozott immunválasza Baranyi és mtsai. 2013 PloS One FcRn Tg nyulak több (4x) humán T-sejt specifikus poliklonális ellenanyagot (rATG)
termelnek Baranyi és mtsai. 2013 PloS One Ag ELSŐDLEGES IMMUNVÁLASZ T cell priming B B sejt akJválás B T-‐B kooperáció DC TH TH TH IgM AFC RÁOLTÁS, MÁSODLAGOS IMMUNVÁLASZ AFC BM FcRn: hatékonyabb IgG védelem, több IgG Ag FOKOZOTT DIVERZITÁS FcRn: hatékonyabb BM aktiválás B Differenciálódás, izocpus váltás, affinitás érés IgG Az FcRn fokozott kifejeződésének hatása a humorális FcRn: hatékonyabb B sejt aktiválás immunrendszerre Ag Ag Ag FcRn: több Ag-IgG IC g MAGASABB AgSPECIFIKUS IgG TITER, NAGYOBB AFFINITÁS DC FcRn: több dendritikus sejt, amely nagyobb hatékonysággal prezentálja az NE antigéneket FcRn: több neutrofil, amely nagyobb hatékonysággal szállít antigéneket a nyirokszervekbe Kacskovics és mtsai. 2011 Az FcRn-t fokozott mértékben kifejező Tg egerek és
nyulak jellemzői: (1) csökken az an-gén(Ag)-‐specifikus IgG lebomlása (2) fokozo? mértékű az Ag-‐specifikus humorális immunválasz; nagyobb lép és a benne lévő Ag-‐specifikus immunsejtek száma jelentősen emelkedik (3) a gyengén immunogén Ag ellen is megfelelő mértékű specifikus immunválasz alakul ki (4) az immunválasz ellenanyag diverzitása fokozódik (5) a lépsejtekből jelentősen nagyobb számú hibridóma állítható elő (6) nem alakul ki autoimmunitás Creating Transgenic Animals for Quality Antibodies www.immunogenescom Köszönöm a figyelmet! eGFP transzgénikus sertések – Prof. Bruce Whitelaw - Roslin Istitute, UK, 2007
hónapok évek Immun hiányos beteg - intravénás immunglobulin kezelése (IVIG) (mesterséges passzív) Saját ellenanyag termelés (természetes aktív) Manz et al. 2005 Nature Rev Immunol Rh negatív vérsejt Anyai immuntranszport: természetes, passzív immunizálás Rh pozitív vérsejt életfontosságú, bár alkalmanként hátrányos Ellenanyag (IgG) Rh negatív vérsejt Ellenanyag (IgG) az Rh inkompatibilitás oka az anyai immuntranszport (hemolitikus anaemia) Rh pozitív vérsejt http://www.nlmnihgov/medlineplus/ency/presentations/100217 1htm Hemolitikus anémia állatokban x szamárkanca mén Kolosztrummal átadott anti-ló vörösvérsejt ellenanyagok Súlyos beteg öszvércsikó (ugyanannak a párnak a második csikaja) Lulut, a Budapesti Állatkertben született orrszarvút, mesterséges anyai immuntranszporttal (ló IgG) tettük védetté Születés utáni IgG szint idő (napok) Sós és mtsai. 2006 Az ellenanyagok
mesterséges alkalmazásai Terápia Mágikus lövedékek Diagnosztika Kígyóméreg elleni antitest terápia (mesterséges, passzív immunizálás) kígyóméreg Ellenanyag termelés birkában Állati eredetű fehérje emberben immunreakcióhoz vezet! Szervkilökődést megelőző antitest terápia (mesterséges, passzív immunizálás) egészséges vese Nyúlban termelt T-limfocita specifikus ellenanyagokkal ($ ~400 m/év) T-limfociták által elpusztított vese - szervkilökődés Állati eredetű fehérje emberben immunreakcióhoz vezet! Poliklonális ill. monoklonális ellenanyag tulajdonságai poliklonális ellenanyag monoklonális ellenanyag www.chemiconcom Monoklonális ellenanyagok előállítása Egér immunizálás a kérdéses molekulával Lépsejtek izolálása Mielóma sejtek Fúzió Hibridómák Szelekciós közegben tenyésztés Monoklonális ellenanyagok termelése Non-Hodgkin limfóma Tünet: A non-Hodgkin-limfóma legjellemzőbb
tünete a fájdalmatlan nyirokcsomó-megnagyobbodás, amely a nyakon, hónaljban vagy a lágyék területén jelentkezik, de más testtájékon is előfordulhat. Ha nagyobb csomót észlelünk, nem kell mindjárt limfómára gondolni, hiszen a különféle fertőzések okozta nyirokcsomóduzzanatok előfordulása gyakoribb, mint a rosszindulatú megbetegedés. Ha ez tartósan, két hét után is fennáll, vagy még a megfigyelési idő alatt tovább nő, és más okra nem derül fény, mindenképpen vizsgálódni kell tovább, részletes orvosi kivizsgálásra van szükség. Ok: a B-limfociták korlátlan osztódása csecsemőmirigy/tímusz csontvelő lép nyirokcsomók A nyaki nyirokcsomó megnagyobbodása utalhat rosszindulatú limfómára. A szervezet nyirok szervei Kezelés: kemoterápia, sugárkezelés, valamint immunterápia Non-Hodgkin limfóma – kezelési lehetőségek „Várj és figyelj” Besugárzás Kemoterápia Immunterápia Non-Hodgkin limfóma
kezelése - kemoterápia A mellkas felső régiójában egy nyirokcsomóból kialakult tumoros szövet. A tumoros szövet mérete jelentősen csökken a kemoterápia hatására. A daganatos nyiroksejtek gyorsan osztódnak ezért érzékenyek a megfelelő kemoterápiára, röntgenbesugárzásra. A betegek többsége jól reagál ezen kezelés valamelyikére, vagy a kettő kombinációjára. Bizonyos esetekben azonban agresszívabb kezelésre is szükség lehet. Hátránya, hogy nem specifikus, azaz a szervezet valamennyi gyorsan osztódó sejtjét elpusztítja – súlyos mellékhatásokkal, komplikációkkal jár. CD20 – ideális célpont An;géntől független érés Őssejt Pre-‐B-‐sejt CD20 Éretlen B-‐sejt An;géntől függő érés Ére8 B-‐sejt Ak;vált B-‐sejt Plazma sejt Rituximab - a CD20+ B sejteket célozza és pusztítja 1. Ellenanyagfüggő sejtfüggő sejtölés
(ADCC) Természetes ölő sejt Sejt lízis B-‐limfocita 2. Komplement-függő sejtölés (CDC) Komplement ak;válás Sejt lízis B-‐limfocita 3. Programozott sejthalál (apoptózis) kiváltása Sejt lízis B-‐limfocita Non-Hodgkin limfóma kezelése – monoklonális ellananyaggal (Rituximab) A hasüregben számos nyirokcsomó megnagyobbodása látható – tumoros nyirokcsomók Rituximab hatására a tumorok mérete jelentősen csökken, sőt eltűnik. A limfóma kezelésében mérföldkövet jelentett az immunterápiának az a formája, amely a daganatos nyiroksejtek ellen kifejlesztett ellenanyaggal, a gazdaszervezet jelentős károsítása nélkül csak a beteg sejteket pusztítja el. Ez az új, jól tolerálható immunterápia ma már a kezelés standard részévé vált. A célzott kezelés, egy a daganatsejtek felszínén nagy mennyiségben található fehérjéhez kötődik, és a szervezet
védekező rendszerének segítségével az így megjelölt beteg sejtek pusztulását eredményezi. Alkalmazásával a terápiás eredmények javulása észlelhető, a mellékhatások fokozódása nélkül. Tumorterápia ellenanyagokkal - anti-CD20 monoklonális ellenanyag (Rituximab) Forrás: Roche (Genentech) egér MAb-ok (Köhler és Milstein, 1975) A terápiás monoklonális ellenanyagok “evolúciója” 11 év muromonab-CD3 (Orthoclone OKT3), 1986 kiméra MAb-ok (Morrison és mtsai, 1984) 10 év abciximab (ReoPro), 1994 humanizált MAb-ok (Jones és mtsai, 1986) 11 év daclizumab (Zenapax), 1997 phage display segítségével nyert MAb-ok (McCafferty és mtsai, 1990) 12 év adalimumab (Humira), 2002 egér szekvenciák glikolizálódás helye humán szekvenciák CDR régiók humanizált egerek segítségével nyert humán MAb-ok (Lonberg és mtsai, Green és mtsai , 1994) 12 év panitumumab (Vectibix), 2006 | I I I I | I I I I | I I I I | I I I I | I I I I | I
I I I | I I I I | I I I 1980 1985 1990 1995 2000 2005 2010 1975 Lonberg, N. (2005) "Human an;bodies from transgenic animals." Nat Biotechnol 23 (9): 1117-‐1125 alapján módosítva – Nagy Antal Balázs MSc Humanizált transzgenikus egerek Jakobovits, A., R G Amado, et al (2007) "From XenoMouse technology to panitumumab, the first fully human an;body product from transgenic mice." Nat Biotechnol 25(10): 1134-‐1143 alapján módosítva – Nagy Antal Balázs Inak^v egér Ig! lánc gén keresztezés Inak^v egér IgH lánc gén dupla KO egér törzs (nem képes egér ellenanyagok előállítására) humán IgL gén
beültetése humán IgH gén beültetése keresztezés egér embrionális őssejtek csak humán ellenanyagok előállítására képes egér törzs humán és egér ellenanyagok előállítására is képes egér törzs egér IgH gén egér Ig! gén humán IgL gén humán IgH gén Dupla transzkromoszomális egér: a humán nehéz- és könnyű (k)–láncot hordozzák Tomizuka et al 2000 PNAS Humán poliklonális ellenanyagot termelő transzkromoszómális szarvasmarha - Hematech Kuroiwa et al. 2002 Nature Biotech Az FcRn szerepe az IgG homeosztázisban Roopenian and Akilesh 2007 -‐ alapján A szarvasmarha FcRn-t fokozott mértékben kifejező transzgénikus egerek előállítása bakteriális mesterséges kromoszómával (BAC) bFcRn mRNS (Northern
blot) vt bovin Tg#14 he ho Tg#19 he ho bFcRn kDa Fluorescence In Situ HybridizaJon bFcRn protein (Western blot) B4 vt Tg#14 Tg#19 63.8 -‐ 49.5 -‐ bFcRn 37.4 -‐ Bender és mtsai. 2007, Cervenak és mtsai 2011 bFcRn Tg egerekben fokozott mértékű antigén-specifikus ellenanyag termelődik Cervenak és mtsai. 2011 bFcRn Tg egerekben fokozott mértékű a humorális immunválasz: Nagyobb lép, több lépsejt, több antigén-specifikus B-sejt Cervenak és mtsai. 2011 A bFcRn Tg egerek hatékony immunválasza gyengén immunogén antigénekre az Ekiert et al. 2009 Science KLH-‐hoz konjugált HA2-‐pep;d (influenza
hemagglu;n konzervált, nem immundomináns epitópja) csak a Tg állatokban válto8 ki megfelelő immunválaszt Végh és mtsai. 2011 A bFcRn Tg egerek hatékony immunválasza az 1. típusú kannabisz receptorra (CB1) értékes monoklonális ellenanyag előállításához vezetett CB1-‐specifikus IgG Jter CB1-‐specifikus immunhisztokémiai jelölés agymetszeten Monoklonális ellenanyag előállítás Egér típus Hibridómák száma CB1 pozitív klónok (IgG) Balb/c 580 0 bFcRn Tg 1634 10 Nagy affinitású CB1-‐specifikus monoklonális ellenanyag 404 (3C2) Kd = 1.7 E-9M Együttműködés Dr. Katona Istvánnal (MTA, KOKI) Nyúl FcRn Tg nyúl fokozott immunválasza Baranyi és mtsai. 2013 PloS One FcRn Tg nyulak több (4x) humán T-sejt specifikus poliklonális ellenanyagot (rATG)
termelnek Baranyi és mtsai. 2013 PloS One Ag ELSŐDLEGES IMMUNVÁLASZ T cell priming B B sejt akJválás B T-‐B kooperáció DC TH TH TH IgM AFC RÁOLTÁS, MÁSODLAGOS IMMUNVÁLASZ AFC BM FcRn: hatékonyabb IgG védelem, több IgG Ag FOKOZOTT DIVERZITÁS FcRn: hatékonyabb BM aktiválás B Differenciálódás, izocpus váltás, affinitás érés IgG Az FcRn fokozott kifejeződésének hatása a humorális FcRn: hatékonyabb B sejt aktiválás immunrendszerre Ag Ag Ag FcRn: több Ag-IgG IC g MAGASABB AgSPECIFIKUS IgG TITER, NAGYOBB AFFINITÁS DC FcRn: több dendritikus sejt, amely nagyobb hatékonysággal prezentálja az NE antigéneket FcRn: több neutrofil, amely nagyobb hatékonysággal szállít antigéneket a nyirokszervekbe Kacskovics és mtsai. 2011 Az FcRn-t fokozott mértékben kifejező Tg egerek és
nyulak jellemzői: (1) csökken az an-gén(Ag)-‐specifikus IgG lebomlása (2) fokozo? mértékű az Ag-‐specifikus humorális immunválasz; nagyobb lép és a benne lévő Ag-‐specifikus immunsejtek száma jelentősen emelkedik (3) a gyengén immunogén Ag ellen is megfelelő mértékű specifikus immunválasz alakul ki (4) az immunválasz ellenanyag diverzitása fokozódik (5) a lépsejtekből jelentősen nagyobb számú hibridóma állítható elő (6) nem alakul ki autoimmunitás Creating Transgenic Animals for Quality Antibodies www.immunogenescom Köszönöm a figyelmet! eGFP transzgénikus sertések – Prof. Bruce Whitelaw - Roslin Istitute, UK, 2007
Just like you draw up a plan when you’re going to war, building a house, or even going on vacation, you need to draw up a plan for your business. This tutorial will help you to clearly see where you are and make it possible to understand where you’re going.
