Biológia | Genetika » Sejt és szövettenyésztés

SEJT- ÉS SZÖVETTENYÉSZTÉS 2005/2006 tanév I. félév 10 hét SEJTTENYÉSZTÉS A sejtek szervezeten kívüli, in vitro (=üvegben) szaporítása ELŐNYEI: • Jól definiált és módosítható környezet •Meghatározott sejttípusok •Nagy mennyiségű sejt nyerhető •Sok sejtfunkció vizsgálható •Állatkísérletek részbeni kiváltása TÍPUSAI: • Primer tenyészet • Sejttörzs • Sejtvonal egyetlen sejt (SEM) Sejtkolónia 0.01 mm 1 mm Petricsésze sejtkolóniákkal 100 mm PRIMER TENYÉSZET • A sejtek közvetlenül egy szövetdarabból származnak Először 1907-ben alkalmazták: 1 nap Gerincvelő explantátum + nyirok A tenyészetben axonok jelennek meg! Tenyésztett neuronok fejlődő nyúlványokkal SEJTTÖRZS • Primer tenyészetből ered Sejtek izolálása Szövetdarab =explantátum tápfolyadék Sejtek kiültetése sejtek tenyésztőedény • A letapadt sejtek osztódnak és növekednek • Tápfolyadék szükséges a

növekedéshez • 50-100 osztódás után a sejtek meghalnak SEJTVONAL • • • • • Halhatatlan, immortalizált Genetikai hibák (aneupoidia) Kontaktgátlás elvesztése Korlátlan növekedés Csökkent adhéziójú, esetleg szuszpenziós tenyészet • Egérben tumort képezhet • Vagy transzformálódott sejtekből ered (spontán vagy karcinogének, vírusok, besugárzás révén) pl. 3T3 21F vonal, CHO • Vagy tumorból származik pl. HeLA vonal - méhnyakrákból származó (Henrietta Lacks, 1951) Normális Kontaktgátlás van Vírus transzformált Egymásra növő,felgömbölyödő sejtek normális sejtek SEM transzformált sejtek OLDOTT ANYAGOK • Tápfolyadék • Szérum • Hormonok • Növekedési faktorok • Letapadási faktorok SEJTEK ÉS SEJTKÖLCSÖNHATÁSOK •Sejtkölcsönhatás: homológ = sejt denzitás heterológ = együtttenyésztés (co-culture) •Metabolitok és termékek OPTIMÁLIS KÖRNYEZETI autokrin és parakrin

hatás •Anyagcsere ráta FELTÉTELEK MÁTRIX KÖLCSÖNHATÁSOK •Tenyésztő felület pl. műanyag, üveg, membránok, mikrogyöngyök •Bevonat (coat) pl. kollagén, zselatin, feeder layer (tápláló sejtréteg) Matrigel, Biomatrix FIZIKAI PARAMÉTEREK • Hőmérsklet • pH (indikátor+puffer) • Oxigén/Széndioxid konc. • Páratartalom • Ozmolaritás • Statikus vagy dinamikus tenyészet MŰANYAG TENYÉSZTŐ EDÉNYEK MEMBRÁN INZERTEK R1 ES sejtek fibroblaszt feeder layeren D3 ES (embrionális ős)sejtek fibroblaszt feeder layeren 96 lyukú plate IgM termelő 4G12 hybridoma sejtek myeloma sejtek SZUSZPENZIÓS TENYÉSZET: nem letapadó, úszó, általában hemopoetikus vagy erősen transz formált daganatos sejtek, nem igényelnek speciális felülete MIKROGYÖNGYÖN TENYÉSZŐ SEJTEK Sytox orange magfestés A SEJTSZÁM VÁLTOZÁSA AZ IDŐ FÜGGVÉNYÉBEN Konfluens tenyészet SEJTSZÁM VÁLTOZÁS AZ IDŐ FÜGGVÉNYÉBEN 3. plató fázis

2. log fázis 1. lag fázis tápcsere nélkül sejtpusztulás 9.Preparátum: Chang máj monolayer tenyészet (MGG) Epitheloid sejtek Jóindulatú májdaganatból származó sejtvonal. Nincs kontaktgátlás Hipotriploid, modális kromoszóma száma: 65. HeLa markerek jelenléte miatt a sejtvonalat szennyezettnek tekintik. 9. Preparátum: Chang máj monolayer sejttenyészet Egymásra nőtt sejtek A sejtmorfológia változik a denzitással!! 17. Preparátum: Fibroblasztszerű sejtek monolayer tenyészete (MGG festés) Osztódó sejt 20 x nagyítás Irodalom  Fülöp (Szerk.): Biológiai Gyakorlatok IV rész