Egészségügy | Reumatológia » Az allergiás betegségek diagnosztikájának in vitro laboratóriumi módszerei

Az allergiás betegségek diagnosztikájának in vitro laboratóriumi módszerei Sipka Sándor a.) Hiperszenzitivitás Kóros állapot, amiben olyan külső ingerek okoznak betegségtünetet az érintett személyeknél, amik másoknál ezt nem hozzák létre. b.) Allergia Hiperszenzitivitási reakció, amit immunológiai mechanizmusok hoznak létre. c.) Atopia Olyan személyes vagy öröklött tendencia, ami fokozott IgE produkciót eredményez kis dózisú allergénekkel szemben, amik főként fehérjék, és amik kiváltják az asztma rhinoconjunctivitis vagy eczema/dermatitis tüneteit. Az allergiás eredetű kórképek  a gyermekkori asthma bronchiale esetek túlnyomó többsége  a szezonális és nem szezonális allergiás nátha  a szezonális és ritkábban, egész éven át tartó allergiás conjunctivitis  az atópiás dermatitisek különböző megjelenési formái  az urticaria és az angioneuroticus oedema  az ételallergia bizonyos

típusai  a rovarcsípés allergiák  egyes gyógyszerérzékenységek  az anaphylaxiás shock  neuroallergiás kórképek  extrinsic alveolitisek (részben) Az allergiás megbetegedések klinikai beosztása Légúti allergiás megbetegedések: Bőrgyógyászati allergiák: Immunkomplex megbetegedések: Táplálék allergiák A szem allergiás megbetegedései Gyógyszerallergiák rhinitis asthma bronchiale, stb. atopiás dermatitis urticariák ekcémák stb. IC depozíció arthus reakció (IC-PMN-proteáz, nekrózis) vasculitis allergica stb. Johansson et al. Hypersensitivity Allergic hypersensitivity (immunologic mechanism defined or strongly suspected) IgE-mediated Nonatopic Insect sting Helminths Nonallergic hypersensitivity (immunologic mechanism excluded) Not IgE-mediated Atopic T cell:e.g,contact dermatitis, celiac Eosinophil:e.g, gastroenteropathy IgG-mediated:e.gallergic alveolitis Drugs Other Other Immunológiai reakciók Az

allergiás gyulladások típusai I. típusú reakció: IgE mediált allergiás reakció II. típusú reakció: IgG és IgM indukált citotoxikus reakció III. típusú reakció: immunkomplexek által okozott szövetkárosodások IV. típusú reakció: Th1 limfociták által kiváltott „késői típusú” gyulladás I.típusú allergiás reakció: - IgE mediált reakció - „azonnali” (az allergénnel való találkozás után 4 órán belül jelentkező) reakció - hízósejtekből, basofil és eozinofil sejtekből, makrofágokból és trombocitákból felszabaduló mediátorok okozzák a tüneteket Meditárok: hízósejtek/bazofilok Hisztamin, triptáz PGD2, LTC4 PAF IL-1, IL-4, IL-5 TNFalfa, IFNgamma eozinofilok ECP MBP szabad gyökök LTC4, PAF IL-5 makrofágok proteázok PGD2, PGE2 TxA2, LTB4 LTC4, PAF IL-1, TNF szabad gyökök trombociták szerotonin hisztamin TxA2 szabad gyökök Allergének: Gyógyszerek (penicillin, stb.) Inhalatív allergének: pollenek,

(parlagfű /Ambrosia elatior/, üröm stb.) állati szőrök (macska, kutya, stb. ) házipor atkák gombák (penész, bőr stb) textil/gyapjú Rovarok: háziméh, darázs stb. Nutritív allergének: tej, tojás, szója stb. Anaphylaxia: Életveszélyes állapot, amit ezen mediátorok hirtelen, nagy mennyiségű keringésbe, bőrbe, tüdőbe, gasztrointesztinális rendszerbe kerülése hoz létre. Két forma: a. -IgE mediált forma b. -nem IgE (komplement, egyéb faktor)mediált Laboratóriumi diagnosztika: •Szérum össz-IgE meghatározás (nefelometria, turbidimetria) •Allergén specifikus IgE (RAST, ELISA, FIA, dot-blot technika) •Aktivitás mérés: szérum triptáz •ECP szint mérés •Vérkép (eozinofila) vizsgálat •In vivo provokációs tesztek: bőrpróbák II. típusú allergiás reakció: Mechanizmus: IgM és IgG által kiváltott citolitikus és citotoxikus, szövetkárosító folyamatok - klasszikus komplementreakció sejtlízissel - aktivált C3

aktiválja a PMN, Eo, makrofág/Mo sejteket - IgG kötődés effektor (K, trombocita, PMN, Eo, makrofág/Mo) sejtekhez Allergének: gyógyszerek: kinin, furosemid, aranysó, indomethacin, szulfonamidok, szalicilátok, kloramphenicol Laboratóriumi diagnosztika: - komplement aktiválódás mérés - PMN, Eo, makrofág/Mo aktiválódás kimutatás - ADCC III. típusú allergiás reakció: Mechanizmus: immunkomplexek (IC) által okozott szövetkárosodások IC lerakódás a keringésben IC lerakódás a szövetekben Allergének: Gyógyszerek: antibiotikumok, benzotiazin, hidantoin Baktériumok: Streptococcus, stb. Vírusok: hepatitis B, C, stb. Laboratóriumi diagnosztika: IC mérés szérumban Komplement faktor és aktivitás mérés szérumban Szövettan, IC kimutatás mikroszkóposan IV. típusú allergiás reakció Mechanizmus: Th1 limfociták citokinjei által kiváltott, „késői típusú” gyulladás, ami az allergén expozíció után 12-24 óra múlva alakul ki.

Formái: Kontakt túlérzékenység: Hapten-carrier komplex-Langerhans sejtek- Th1 sejtek, citokinek, egyéb mediátorok (IC), Antigének:nikkel, perubalzsam, illóolajok, Hg vegyületek, festékek, gyógyszerek, kozmetikumok, stb. Tuberkulin típusú reakció: Mononukleáris (limfocita-monocita) sejtinfiltrátum az antigén bejutás helyén Antigén: különböző baktérium fehérjék vagy kémiai anyagok (cirkórium, berillium), A transzplantációs immunreakció hasonló mechanizmusú Granulomás reakció: Makrofágokban, monocitákban megtapadó intracelluláris kórokozók (Mycobacterium, lepra, Listeria, stb.) vagy egyéb idegen anyagok (talkum, berillium, stb.) hozzák létre hosszú idő alatt: „óriássejtek” képződnek, miket epotheloid sejtek vesznek körül Laboratóriumi diagnosztika: - hisztológia (mononukleáris sejtek kimutatása) - antigén indukált limfocita blasztos transzformáció és - citokin termelés mérés KÉRDŐÍV (A leggyakoribb allergének a

klinikai gyakorlatban) Név: Munkahely: Beosztás: Város: Ország: Dátum: . Szezonális inhalatív allergének allergén Parlagfű Pázsitfű Előfordulása gyakoriság 1-X Nem szezonális inhalatív allergének allergén Házipor atka (D. farinae) Házipor atka (D. pteronyssinus) Előfordulás gyakoriság 1-Y Étel allergének allergén Tojás Tej (kazein) Feketeüröm Macskahám szőr Mogyoró Rozs Kutyahám, -szőr Szójabab Útifű Csirketoll Búzaliszt Pitypang Kacsatoll Földimogyoró Angolperje Libatoll Narancs Csomós ebír Papagájtoll Paradicsom Nyírfa Csótány Tőkehal Előfordulás gyakorisága 1-Z KÉRDŐÍV (folytatás) Szezonális inhalatív allergének allergén Előfordulása gyakoriság 1-X Nem szezonális inhalatív allergének allergén Előfordulás gyakoriság 1-Y Étel allergének allergén Mogyoró Aspergillus Mandula Fűz Cladosporium Sertéshús Szil Fusarium Szezámmag Rosznok Mucor Banán Falgyom

Penicillium Őszibarack Vadsóska Hörcsöghám Zeller Disznóparéj Lóhám Tonhal Libatop egyebek Élesztőgomba Éger Kagyló, rákfélék Platán Borsó Nyárfa Marhahús Kukorica Rozsliszt Egyebek Csirkehús Kukorica Előfordulás gyakorisága 1-Z Keresztreagáló allergének Nyír alma, sárgarépa, burgonya, zeller, meggy, körte, mogyoró Parlagfű sárgadinnye, görögdinnye, banán, uborka Fekete üröm zeller, sárgarépa, mustár, ánizs Tehéntej kecsketej, birkatej, marhahús Földimogyoró dió, szója, zöldborsó, zöldbab, lencse Lencse földimogyoró, szója Legújabb irányzatok I. Specifikus immunterápia alkalmazása, ahol lehetséges II. Allergén „kerülés” megszervezése és megtanítása III. A legkorábbi diagnózis felállítása és a kezelés megkezdése IV. Az allergia epidemiológiai okainak kutatása világszerte (EK) Az allergia diagnosztikájának fő módszerei I.Típusú reakció: in vivo: kután

Prick test in vitro: szérum össz-IgE allergén specifikus IgE allergén specifikus IgG (tej, tojás, szója, stb. csecsemőkorban) hízósejt/bazofil aktivációs termék mérés (triptáz, hisztamin, leukotrién stb.) eozinofil aktivációs termék mérés: (eozinofil kationos protein, ECP) III.Típusú reakció: in vitro: allergén-IgG/IgM komplex kimutatás (ELISA, Ouchterlony) IV.Típusú reakció: in vivo: epikután bőr teszt (kontakt allergén) in vitro: limfocita proliferációs teszt (gyógyszerek) Allergén specifikus IgE meghatározási módszerek Típusaik: 1. Az allergén szerint: természetes allergén kivonat rekombináns technikával előállított allergén allergén kivonat keverékek 2. Az anti-IgE kimutatás módszere szerint: RIA ELISA FIA KLIA Használhatósági kritériumok: szenzitivitás specificitás pozitív prediktív érték negatív prediktív érték Problémák 1. Közös szénhidrát epitopok különböző allergéneken (keresztreakciók) 2.

Nemzetközi standardok hiánya (Pharmacia Ca?) 3. Minden módszerre külön klinikai értékelés szükséges 4. Regióspecifikus allergén panellek hiánya 5. Különböző és nem teljesen átfedő nemzetközi külső kontroll rendszerek léteznek, ha működnek egyáltalán Az allergiás beteg kivizsgálásának ajánlott folyamata Allergológiai és Klinikai Szakmai Kollégium (KIASZK) ajánlása: 1. Az allergiára utaló tünetekkel jelentkező beteg kivizsgálását és kezelését csak azok az orvosok végezzék, akik allergológus és klinikai immunológus ráépített szakvizsgával rendelkeznek, vagy az alapszakvizsgájuk szerint belgyógyászok, gyerekgyógyászok, tüdőgyógyászok, bőrgyógyászok, szemészek vagy fül-orr-gégészek. 2. Az anamnézisre épülő első diagnosztikus beavatkozásnak a bőrpróba ajánlott. 3. Az in vitro laboratóriumi tesztek közül a diagnózis felállításához három módszer javasolt azokban az esetekben, melyekben a bőrpróba

vagy nem kivitelezhető, vagy eredménytelen: szérum össz IgE meghatározás,  szérum allergén specifikus IgE meghatározás,  allergén indukált T sejt proliferáció mérés.  4. Az in vitro laboratóriumi tesztek végzésének indikációi:  bőrbetegség fennállása,  nincs megfelelő antigén a bőrteszthez,  a bőrteszt eredménye és az anamnesztikus adat eltér egymástól,  a bőrteszttel anaphylaxia provokálható,  a specifikus immunterápia kezdetén és végén,  a beteg fizikális és tudati állapota miatt a bőrteszt nem kivitelezhető,  csecsemőknél a korai szenzitizáció kimutatására (főleg tojás és tej vonatkozásában)!  immunszupprimált állapotban, amikor a gyógyszer nem hagyható el,  epidemiológiai sorozat méréseknél,  minden esetben, mikor bőrteszt nem végezhető,  az allergiás gyulladás súlyosságának kvantitatív jellemzésére. A negatív specifikus IgE eredmény értéke: Nem

valószínűsíti az atopiás mechanizmust (étel allergiák!) Az allergénspecifikus IgG mérés értéke A főleg tej, vagy néhány egyéb étel (tojás, szója) fehérje ellen képződött IgG nem atopiás, allergiás mechanizmusra utal. A fokozott bélpermeabilitási állapot jelzője (csecsemőkorban, gyulladás stb.) de a specifikus IgE emelkedéséhez társulva előjele lehet gyermekekben a főleg tehéntejfehérje érzékenység elnyújtottabb, hosszabb fennállásának. Az allergén specifikus in vitro módszerek egyéb formái Bazofil aktivációs tesztek: hisztamin felszabadulás mérés leukotrién felszabadulás mérés CD63 expresszió mérés Limfocita aktivációs tesztek: T sejt proliferációs vizsgálatok citokin termelési vizsgálatok nitroblueterazólium (NBT) teszt, gyógyszer allergiákban leukocita migrációs teszt Kvantitatív PCR-IL-4 mérés „Chip” technika rekombináns allergénekkel Az in vitro diagnosztika legaktuálisabb feladata: a

tojás és tej irányú szenzitizáltság kimutatása a legkorábbi időszakban még csecsemőkorban